小鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法，單抗包被于酶標板上，標本和標準品中的小鼠試劑會與單抗結合，游離的成分被洗去。加入生物素化的抗小鼠試劑抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素，生物素與親和素特異性結合;抗小鼠試劑抗體與結合在單抗上的小鼠試劑結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，若反應孔中有小鼠試劑，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現藍色，加終止液變黃。在450 nm處測OD值，小鼠試劑濃度與OD450值之間呈正比，可通過繪制標準曲線求出標本中小鼠試劑的濃度。