小鼠ELISA試劑盒的測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。ELISA應用時各個操縱步驟的應留意，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，要嚴格遵照劃定操縱，才能得出正確的結果。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出，不可產氣憤泡。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。