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假結核耶爾森菌PCR檢測試劑盒說明書

產品簡介

假結核耶爾森菌PCR檢測試劑盒說明書
上海聯祖生物相關產品:
SP-D檢測試劑盒 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。

更新時間:2021-03-13
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 假結核耶爾森菌PCR檢測試劑盒說明書

 英文名稱

 Yersinia pseudotuberculosisPCR

 貨號

 LZP7483

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
BGPNα-苯甲酰-L-精氨酸 98.5%葛根素 98%

α-Glycerophosphate disodium salt hexahydrate4-硝基-L-苯氨酸 98%黃藤素 97%

DL-α-Glycerol phosphate magnesium salt hydrate4-硝基-D-苯氨酸 99%擬人參皂苷F11 分析標準品,≥98%

Paraffin oil4-硝基-DL-苯氨酸 98%安石榴苷  98%

Lileic acidNeuromedin C ≥97% (HPLC)根皮苷,二 98%

Oleic acid美拉諾坦 ≥95% (HPLC)異槲皮苷 98%

5-FOAD-鳥氨酸鹽酸鹽 99%D-(-)-奎尼酸 98%

Shikimic acidN'-Cbz-L-鳥氨酸 98%金絲桃苷 分析標準品,≥98%

Palmitoleic acidL(+)-2,3-二氨基氨酸鹽酸鹽 97%槲皮素 97%

CyDTAL-鳥氨酸鹽酸鹽 98%白藜蘆 99%

PABAN-叔丁氧羰基-N'-芐氧羰基-D-鳥氨酸  98%吳茱萸次堿 98%

PABA sodium saltN-芴甲氧羰基-(N'-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代環己-1-亞基)乙基)-LL-鼠李糖,一 99%

4-Amibenzenesulfonic acidL-鳥氨酸甲酯  99%(+)-蕓香苷,三 97%

Maleic acid5′-O-(4,4′-二甲氧基三苯甲基)胸苷 98.0%迷迭香酸 97%

Maleic acid sodium saltOxime Resin 0.3~0.8mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB左旋延胡索乙素 分析標準品,≥98%(HPLC)

Sulfamic acidOrexin A human, rat, mouse ≥97% (HPLC)紅景天苷  分析標準品,≥97.5%(HPLC)

2-甲基四(MeTHF)(Standard for GC,≥99.5%(GC))Brg1 (P680) AntibodyMenin/Men1  Menin抑癌蛋白抗體

異戊烷(Standard for GC,≥99.7%(GC))MLH1 (4C9C7) Mouse mAbmembrane glycoprotein E(VZV)  人痘帶狀皰疹病毒gE蛋白抗體

烯酸甲酯(MA)(Standard for GC,>99%(GC))MLH1 (4C9C7) Mouse mAbMelama HMB45/Melama/Melan-A/MART-1  黑色素瘤相關抗原/黑色素-A抗體

丁酸甲酯(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-NPM (Thr95) AntibodyMelamine(1B12)  三聚胺單克隆抗體

α-甲基烯酸(Standard for GC)Cas9 (7A9-3A3) Mouse mAb (PE Conjugate)Melamine  三聚胺抗體

乙二甲(standard for GC,>99.7%(GC))Phospho-Keratin 17 (Ser44) AntibodyMelamine  三聚胺抗體

N-甲基吡咯烷酮(NMP)(standard for GC,≥99.6%(GC))Phospho-NPM (Ser4) (D19C1) XP® Rabbit mAbMelamine  三聚胺抗體

異丁(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-NPM (Ser4) (D19C1) XP® Rabbit mAbMel18/ZNF144  鋅指蛋白蛋白144抗體

甲基環己烷(Standard for GC,≥99.8%(GC))Phospho-MDM2 (Ser166) AntibodyMEK6  絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體

乙酸甲酯(GCS,≥99.9% (GC))Phospho-PNK1 (Ser114/Thr118) AntibodyMEK5/MAP2K5  絲裂原活化蛋白激酶激酶5抗體
假結核耶爾森菌PCR檢測試劑盒說明書G蛋白偶聯受體GPR91蛋白抗體Taxoquine中文名:別名:分子式:C20H28O4

特異性囊腫病液體蛋白15抗體Danshenxinkun A中文名:丹參新醌甲別名:Danshexinkun A分子式:C18H16O4

生長抑制DNA損傷基因GADD45β抗體Przewaquine A中文名:紫丹參甲素別名:分子式:C19H18O4

G蛋白偶聯受體39抗體Deoxyneocryptotanshine中文名:別名:分子式:C19H22O3

細胞生長抑制蛋白22抗體(甲基化控制J蛋白)甾體

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