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人腫瘤多藥耐藥基因PCR檢測試劑盒說明書

產品簡介

特征特性:菌株為呈桿狀,革蘭氏染色為陰性,繁殖方式為裂殖。菌落為圓形,凸起,不透明,表面濕潤光滑,邊緣整齊,呈乳白色。營養類型為異養,好氧,不需光照。可水解七葉靈,不能水解酪蛋白和纖維

更新時間:2021-03-13
訪問次數:670
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 人腫瘤多藥耐藥基因PCR檢測試劑盒說明書

 規格

 50T

 貨號

 LZP7787

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
十二(標準品)HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb二甲酰硫素

二(DEA)(標準品)Liprin β1 AntibodyN-甲酰基-2--5-三氟

2,二硝基標準溶液(1.00mg/ml,基體:甲)Ghost Dye™ Red 780 Viability DyeMETHOXY-2-(TRIFLUOROMETHYL)PHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR

標準溶液(100μg/ml,溶劑:甲)TRAF4 (D1N3A) Rabbit mAb反式-基-1-基-酸

2,二甲(標準品)Syntaxin 1A (D4E2W) Rabbit mAb2-[(酰硫)甲基]-基酸

2,5-二甲(標準品)Flotillin-1 (D2V7J) XP® Rabbit mAb(R)-(-)-alpha-甲氧基

3,二(標準品)Flotillin-1 (D2V7J) XP® Rabbit mAb2,5-二氟磺酰

3,二聯(標準品)Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)羥基-2-萘甲酸甲酯

直接藍6(標準品)ALDH2 AntibodyFLUORO-5-METHOXYBIPHENYL-CARBOXYLIC ACID

分散橙37(標準品)Smac/Diablo (D5S3R) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)6--5-甲基吡啶-酸

鄰二甲酸二酯(標準品)MAVS (D5A9E) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-溴-2-甲基萘

二甲基二化錫(標準品)ULK1 (D8H5) Rabbit mAb (Biotinylad)(2-溴-氧基)四氫-2H-吡喃

二基錫(標準品)VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)硒脲

甲基內吸(標準品)T2 (D6B9Y) Rabbit mAb6-(CYCLOPROPYLAMINO)-5-NITROQUINOLINE

2,4'-滴滴涕(標準品)PKM1 (D30G6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5-甲氧基黃酮

2,4′-DDT標準溶液(100μg/mL,基體:異辛烷)PSD93 (D4Z4D) Rabbit mAb(氟-甲氧基基)三氟酸

4,4'-滴滴涕(標準品)DMAP1 (D4O2G) Rabbit mAb(R)-(+)-2-酸甲酯

溴菊酯(標準品)SimpleChIP® Human DMD Intron 2 Primers2-吡啶酸甲酯

白介素5受體alpha(IL5RA)ELISA試劑盒Phospho-IRAK1 (Thr387)  酸化白介素-1受體相關激酶1100 ul

白介素5(IL-5)ELISA試劑盒IRF3  干擾素調節因子3100 ul

白介素4受體(IL4R/CD124)ELISA試劑盒Phospho-IRF3 (Ser396)  酸化干擾素調節因子3100 ul

白介素4(IL-4)ELISA試劑盒IRAK4  白介素-1受體相關激酶4100 ul

白介素37(IL-37)ELISA試劑盒IL-1RA  白介素-1受體拮抗劑100 ul

白介素35(IL-35)ELISA試劑盒IL-1R1  白介素1受體1100 ul

白介素33(IL-33)ELISA試劑盒IL-1R II  白介素1受體Ⅱ100 ul

白介素32(IL-32)ELISA試劑盒IRF4  干擾素調節因子4100 ul

白介素31(IL-31)ELISA試劑盒ILT2/CD85j  細胞表面免疫球蛋白樣轉錄因子2100 ul
人腫瘤多藥耐藥基因PCR檢測試劑盒說明書1號染色體開放閱讀框57抗體23-Hydroxymangiferonic acid中文名:別名:分子式:C30H46O4

2號染色體開放閱讀框18抗體27-Hydroxymangiferolic acid中文名:別名:分子式:C30H48O4

細胞色素c氧化酶6抗體27-Hydroxymangiferonic acid中文名:別名:分子式:C30H46O4

細胞質膜微囊蛋白-2抗體3-Oxotirucalla-7,24-dien-21-oic acid中文名:別名:分子式:C30H46O3

磷酸化細胞質膜微囊蛋白-2抗體Mangiferolic acid中文名:別名:分子式:C30H48O3

 

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